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huPBMC-NCG

huPBMC-NCG小鼠是将人外周血单个核细胞(Peripheral Blood Mononuclear Cell, PBMC)移植到重度免疫缺陷小鼠NCG体内,从而获得的重建人免疫系统的NCG小鼠模型。

huPBMC-NCG小鼠人源化模型实验设计流程图



药康优势

集萃药康自主研发的NCG小鼠是使用基因编辑技术敲除NOD/ShiltJGpt小鼠的Prkdc及Il2rg基因而获得的重度免疫缺陷品系。NCG小鼠具有T细胞、B细胞、NK细胞缺失的特征,是迄今为止免疫系统缺陷最为彻底的小鼠模型,非常适合人外周血单个核细胞(PBMC)及人造血干细胞(CD34+HSC)移植进行免疫重建。

在NCG小鼠上进行的huPBMC免疫重建效率高,主要以T细胞为主。huPBMC-NCG小鼠免疫重建后可存活1个月左右,可用于进行多种肿瘤免疫药物的评价,同时也是理想的GvHD评价模型。

由于huPBMC供体来源影响免疫重建的进程,集萃药康建立了多个huPBMC 供体库,用于保证huPBMC-NCG免疫重建的稳定性。


业务详情

1. huPBMC-NCG小鼠的生存曲线


分别将来源于供体F和供体G的huPBMC注射到NCG小鼠中,分析huPBMC-NCG免疫重建小鼠的存活时间。由于植入的PBMC为异源免疫细胞,huPBMC-NCG小鼠会随着时间推移产生移植物抗宿主疾病(GvHD),即人源免疫系统攻击小鼠组织器官,最终导致小鼠死亡,缩短了huPBMC-NCG小鼠的使用窗口期。本研究发现NCG小鼠移植huPBMC一个月左右陆续出现死亡。


2. huPBMC-NCG免疫重建速度快,重建细胞以CD3+T细胞为主


利用流式细胞技术检测huPBMC-NCG小鼠人源化进程中外周血中人白细胞比例。结果表明,随着时间推移,huPBMC-NCG小鼠外周血中人白细胞的比例逐渐增加,第三周时平均人白细胞比例超过50%。数据以Mean±SEM形式呈现。


利用流式细胞技术检测在huPBMC-NCG小鼠脾脏、外周血及骨髓中人白细胞的相对含量,结果表明huPBMC-NCG小鼠体内人白细胞分布具有明显的组织差异性,人白细胞水平从高到低为脾脏>外周血>骨髓。数据以Mean±SEM形式呈现。*P<0.05;**P<0.01;***P<0.001。


3. 基于huPBMC-NCG小鼠体内药效试验


分别使用两种不同Donor来源的huPBMC细胞构建huPBMC-NCG,并接种PDL1高表达细胞系MDA-MB-231构建皮下荷瘤模型。PBMC接种后会影响MDA-MB-231在NCG体内的成瘤速度。待肿瘤生长至平均体积约100 mm3时随机分为Vehicle(对照)组及Tecentriq给药组(n=5-6),使用相应药物进行治疗。每周给药2次,连续给药三周,可用于评估Tecentriq等靶向PD-1/PDL1通路药物的抗肿瘤效果。结果显示Tecentriq对肿瘤生长有明显抑制作用(PBMC-01 TGI=45.41%, PBMC-02 TGI= 56.96%)。数据以Mean±SEM 形式呈现。


4. 基于huPBMC-NCG小鼠体内GvHD药效研究


小鼠在重建后会出现GvHD表型,弓背,炸毛现象


5. 基于huPBMC-NCG小鼠评价GvHD药效研究


将huPBMC尾静脉移植至辐照处理后的NCG小鼠(辐照会加速GvHD的反应),然后给药GvHD药物治疗。结果显示GvHD药物延长了huPBMC-NCG小鼠的生存周期,且随着给药剂量的增加,生存周期明显延长,体重增加。


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